Картина написана художником между 1304 и 1305 годами. Джотто изображает особое событие в христианстве — Евхаристию (Тайную вечерю), момент создания Нового Завета. Из-за угрозы со стороны первосвященства собрание было тайным. Тайная вечеря описана во всех евангельских источниках. Ди Бондоне с большим мастерством передал атмосферу вечера и помещения. Интерьер и балдахин художник прорисовал подробно и очень тонко.
Участники таинства ведут тихую беседу, сидя за столом. Апостолы изображены с обеих сторон
стол, благодаря которому композиция становится компактной, возникает эмоциональная связь между участниками братской трапезы. На столе для причастия нет ни еды, ни вина. Ритмически сложный, но в то же время достаточно сбалансированный образ окрашен в теплые тона желто-оранжевого и лилового. Изображение передает идеальное соотношение между пропорциями и тонкими цветовыми градациями. Сюжет в картине сдержанный, изысканный, присущий религиозной живописи, что является одной из отличительных черт стиля Ди Бондоне.
Образ Спасителя наблюдается слева, в отличие от других картин, где художник изображает Христа в центре действия. Нимб золотого цвета возвышается над головой Иисуса.
Его ученики сидят с Иисусом за столом. Над их головами черные ореолы. Каждый персонаж на картинке оснащен индивидуальными функциями.
Джотто прекрасно понимает анатомию человека, поэтому каждая складка прорисована реалистично. Формы реалистично моделируются, если объем формируется за счет выделения основной тени. Таким образом, Джотто передал иллюзию объемного изображения с помощью светотени. Для большей выразительности Ди Бондоне использует коричневые тени вокруг глаз.